Last minute pitanja

[Bogz_Okupaci]

Negdje sredinom osmog mjeseca je započela kolonizacija, a s obzirom da živim u dosta vrućim krajevima, držao sam klimu upaljenu na 25 °C od 0-24h kroz osmi i deveti mjesec. Kad je bilo vrijeme za porađanje, došle su niže temperature, pa nisam više palio klimu.

Mislim da nisam dovoljno dobro odradio prebacivanje spora u špricu u still air boxu, sumnjiv mi je i dio sa sterilizacijom u express loncu.

Na kraju sam od jednog printa napravio 15ak kolačića, a uspjela su dva. Prezadovoljan sam i sa tim, al na proljeće ću gledat da ih 5-6 uspijem porodit.

@haarp
jel trebam bacit fruting chamber ili samo zaraženi kolač?

[kale.kikor]

Cestitam na ova 2 uspela kolacica!
Sta se desilo sa ostalih 13?
Jesi li izmerio tezinu suvih pecuraka sa ta 2 kolaca?

[long_pipe_magician]

OK! stigo je dehidrator. Ubo sam ga na akciji, velik je i jak. Gorenjev. Sad me zanima koliko dugo i na kojoj temperaturi sušite fungice. Već sam pitao harpa ali.... on ima debele gadove, obilne hemeroide i sve neke mutante pa nisam dobio konkretan odgovor. Zapamtio sma jedino da ih nakon sušenja ostavim na zraku pola sata da se ohlade kako bih izbjegao kondenzaciju.

Ja imam normalne fungice zasada, neki standard, prosjek - srednja klasa što bi se reklo. Koje režime mi preporučate?

[harp]

maksimalna tvornička postavka. par sati. makar to nije pravilo. ciljas cracker dry. da nisu "gumene". mora pucat ko prepečenac.
i naravno ostavi da se ohlade kako ne bi uzrokovao kondenzaciju prije skladištenja.

[Firmus]

jel trebam bacit fruting chamber ili samo zaraženi kolač?

Lol, ne trebas bacat kutiju, samo pazi da ne siris kontaminaciju na radni prostor, minimiziraj sirenje spora plijesni ili koju vec kontaminaciju imas... i onda ocisti i pospricaj kutiju alkoholnim octom ili alkoholom 70%.

[kale.kikor]

eto opet mene duduka
ranije nisam busio rupicu na poklopcu kutijice od agra vec sam prilikom sterilizacije poklopac drzao malo otvoren da se ne bi urusile od pritiska pa sve to zamotao u foliju
skoro sam opet poceo sa agrom
nabavio sam neki agar sa tajlanda koji nema nekog dodatka koji svi drugi imaju... kesca od 25 g je oko 5 e...
na 250 ml vode 5 g agra i 5 g tecnog ekstrakta slada. prokuvao sastojke, nalio u posudice koje sam ovaj put busio sa gornje strane i rupu sirine oko 3 mm zalepio medicinskom trakom, pa onda sterilizovao 90 min u ex loncu. 4 agra sam inokulirao sporama dok druga 4 starim agrom

prvo ako ne mislite citati do kraja i malo razmisliti pre nego sto odgovorite, nemojte ni pokusavati da mi pomognete, nema poente,
ako pak stvarno hocete da procitate i pomognete hvala u svakom slucaju!
pitanja:
Koliko agru godi ova rupica na poklopcu? kada se radi po ''ps-u" prave petrijevke koliko sam video nemaju nikakvu rupu i cak ih na mnogim videima oblazu polifyl trakom da bi apsolutno sprecili bilo kakvu razmenu zrakova. Da li ova rupa pogorsava stvar?
Da li je bitno, kada transferujem mic sa agra na novi agar, sa koje ce strane ta '' kocikca'' micelijuma dodirivati agar? ja je stavim okrenutu ka dole tj da micelijum odmah dodiruje novi agar. da li je bitno sa koje je strane?
Posle koliko transfera je pametno agar turati u staklenke sa zrnevljem? prosli put sam 3. ''generaciju'' agra turio u 3 staklenke od kojih je samo jedna bila full kolonizovana dok na druge 2 ni znak micelijuma(apsolutno su bile ciste kao i agar); zato se pitam cemu radim agar ako nece da inokulira zrnje,koja je poenta?
Kada transferujem agar na novi agar, da li sa kolonizovanog agra inokuliram samo jedan,novi agar, ili sa jednog kolonizovanog agra mogu na inokuliram vise agra (osim sto je rizik za kontaminaciju povecan)?
i ne vezano za agar; u SFGC-u su 6 brf kolaca koja provetravam poklopcem 5,6 puta dvendo po par minuta i po potrebi vodom naprskam zidove kutije i perlit, taklo bleje 4 dana na 24 stepeni celzijusa i oko 95 % vlaznosti. Kada mogu da ocekujem plodove ako ih uopste bude bilo??

[KaPaRo21]

eto opet mene duduka
ranije nisam busio rupicu na poklopcu kutijice od agra vec sam prilikom sterilizacije poklopac drzao malo otvoren da se ne bi urusile od pritiska pa sve to zamotao u foliju
skoro sam opet poceo sa agrom
nabavio sam neki agar sa tajlanda koji nema nekog dodatka koji svi drugi imaju... kesca od 25 g je oko 5 e...
na 250 ml vode 5 g agra i 5 g tecnog ekstrakta slada. prokuvao sastojke, nalio u posudice koje sam ovaj put busio sa gornje strane i rupu sirine oko 3 mm zalepio medicinskom trakom, pa onda sterilizovao 90 min u ex loncu. 4 agra sam inokulirao sporama dok druga 4 starim agrom

prvo ako ne mislite citati do kraja i malo razmisliti pre nego sto odgovorite, nemojte ni pokusavati da mi pomognete, nema poente,
ako pak stvarno hocete da procitate i pomognete hvala u svakom slucaju!
pitanja:
Koliko agru godi ova rupica na poklopcu? kada se radi po ''ps-u" prave petrijevke koliko sam video nemaju nikakvu rupu i cak ih na mnogim videima oblazu polifyl trakom da bi apsolutno sprecili bilo kakvu razmenu zrakova. Da li ova rupa pogorsava stvar?
Da li je bitno, kada transferujem mic sa agra na novi agar, sa koje ce strane ta '' kocikca'' micelijuma dodirivati agar? ja je stavim okrenutu ka dole tj da micelijum odmah dodiruje novi agar. da li je bitno sa koje je strane?
Posle koliko transfera je pametno agar turati u staklenke sa zrnevljem? prosli put sam 3. ''generaciju'' agra turio u 3 staklenke od kojih je samo jedna bila full kolonizovana dok na druge 2 ni znak micelijuma(apsolutno su bile ciste kao i agar); zato se pitam cemu radim agar ako nece da inokulira zrnje,koja je poenta?
Kada transferujem agar na novi agar, da li sa kolonizovanog agra inokuliram samo jedan,novi agar, ili sa jednog kolonizovanog agra mogu na inokuliram vise agra (osim sto je rizik za kontaminaciju povecan)?
i ne vezano za agar; u SFGC-u su 6 brf kolaca koja provetravam poklopcem 5,6 puta dvendo po par minuta i po potrebi vodom naprskam zidove kutije i perlit, taklo bleje 4 dana na 24 stepeni celzijusa i oko 95 % vlaznosti. Kada mogu da ocekujem plodove ako ih uopste bude bilo??

Драги
kale.kikor,
петри судови са којима ја радим немају никакву рупицу, са којима кад завршим-обавезно стављам Парафилм М, како не бих долазило до размене вазуха и до контаминације. Разумејући се у микробиологију не би смело да има никакав контакт од стерилизације до паковања са Парафилмом М, сем испред ламинарне кутије где је 99,99% чист ваздух.
Што се тиче трансфера, битно је да агар (односно смеса са агаром) додирује конкретно мицилијум. Можеш да замислиш колико је мало довљно да дотакне мицилијум, кад можеш преко агара и спора да добијеш мицилијум
Док год физички контакт између мицилијума који транферујеш и агара у новом суду.
Ако после 5-7 дана буде цео суд колонизован исечеш као пицу на 6 дела и убациш у зрневље које си пртеходно стерилисао.
БРФ ако је влажност таква и температура таква (што је супер), очекуј за неких недељу дана прву бербу. Први и други флеш ти је сигуран ако си одрадио данк и рол пре стављања на верм.
Све најбоље желим

КаПаРо 21

[kale.kikor]

hvala vam gospodine KaPaRo,vrlo ste ljubazni.
citao sam i slusao kako je najbolje da se pocne sa agarom kako bi bio siguran da sa sporama na printu nema kakvo smece.
moj prit je bio, po svemu sudeci, potpuno cist, ali sam ipak pokusao a agrom koji se nije pokazao najbolje.
1. pokusaj(spore na agar) je prosao super i posle 3 meseca imam jos oko 10ak kolonizovanih "petrijevki"(providna posudica za sos od 40 ml sa spojenim poklopce) koji su skroz cisti.
sledeci transfer na novi agar je prosao sa oko 30% kontaminiranih petrijevki posle nekih nedelju dana; dok 2. transfer je prosao kantastrofa i posle par nedelja 10/10 posudica su kontaminirane.
vidis sto dalje idem to gore sto mi nije jasno
mislio sam da je do sterilizacije, sta bi drugo bilo zato sam i probao ovo sa rupicom na poklopcu kao da bi pritisak usao u posudice i sterilizovao agar smesu. nozic kojim secem agar uvijem u foliju par puta pa ga turim da se kuva sa agrom a sve radim pod SAB-om
Ne znam ni cemu ovoliko piskaranje, vise mi sluzi da vam se zalim kako mi ne ide iako SKORO sve uradim kako treba.
hvala jos jednom

[KaPaRo21]

hvala vam gospodine KaPaRo,vrlo ste ljubazni.
citao sam i slusao kako je najbolje da se pocne sa agarom kako bi bio siguran da sa sporama na printu nema kakvo smece.
moj prit je bio, po svemu sudeci, potpuno cist, ali sam ipak pokusao a agrom koji se nije pokazao najbolje.
1. pokusaj(spore na agar) je prosao super i posle 3 meseca imam jos oko 10ak kolonizovanih "petrijevki"(providna posudica za sos od 40 ml sa spojenim poklopce) koji su skroz cisti.
sledeci transfer na novi agar je prosao sa oko 30% kontaminiranih petrijevki posle nekih nedelju dana; dok 2. transfer je prosao kantastrofa i posle par nedelja 10/10 posudica su kontaminirane.
vidis sto dalje idem to gore sto mi nije jasno
mislio sam da je do sterilizacije, sta bi drugo bilo zato sam i probao ovo sa rupicom na poklopcu kao da bi pritisak usao u posudice i sterilizovao agar smesu. nozic kojim secem agar uvijem u foliju par puta pa ga turim da se kuva sa agrom a sve radim pod SAB-om
Ne znam ni cemu ovoliko piskaranje, vise mi sluzi da vam se zalim kako mi ne ide iako SKORO sve uradim kako treba.
hvala jos jednom

Драги
kale.kikor,
ја сам почео са спорама које сам наручио преко ФСЕ и нисам имао до сад контаминираних спора сем једног стрејна који више не може да се нађе сем донације некога ко већ има тај стрејн.
Довољно је да имаш колонизован 100% петри суд да би могао да га исецкаш као пицу и пребациш у зрневље (кесу или тегле у) или који тек већ радиш. Контаминација долази ако не радиш испред ламинарне кутије или ако није добро стерилисано. И ако су контаминиране споре што је врло ретко.
Није ме мрзело па у наставку качим слику од мојих петри судова које сам данас урадио, 12 Тед и 12 МеКејн стрејна.


На врху се виде споре које сам са принта пребацио полако са пинцетом ( може и са ножићем испред ХЕПА филтера).
Трансфер и клонирање је више за микробиологију и за сопствено унапређење знања, по мом мишљењу, и потребно је много улагати за опрему.
Ја лично наручујем стерилне петри судове (станардне што су 90 или 100мл- 90мл на горе сликама) и након употребе бацам.
Мучим муку генерално са стерилизацијом и екеспрес лонцем већ 5 година

Надам се да сам помогао,
поздрав,

КаПаРо 21

[kale.kikor]

sada vec gnjavim, ali mislis li da bi mogao da iskoristim tih 10ak full kolonizovanih posudica starih 3 meseca( ciste su naravno ali micelijum izgleda slabasno,nekako neravnomerno rasporedjen po sudu?
prosli put, ne znam zasto sam kolonizovao samo 1 od 3 tegle sa ovasom.
jbg ne mam fepa filter il bilo sta slicno, radim u sab-u, sve prebrisem izopropilom i ostale zajebancije
Hvala na vasem vremenu.