Rad u ''Still Air Box-u''

[kale.kikor]

Pozdrav svima, dragi moji!
Necu opisivati komplet kako pravim spric sa sporama il kako inokuliram agar vec ono sto je vazno za uspesan rad u SAB-u i celokupnu pripremu.
Cilj teme je da svi po nesto naucimo, stoga gde vidite da gresim(negde sigurno) ispravite me tako da naucim prave metode rada samim tim i u buducnosti ko bude citao temu da moze nesto da nauci.
Cisto da napomenem da vec godinu dana pokusavam da uzgojim ili nadjem psilocibe ali mi ne ide od ruke, ne zato sto sam glup ili ne organizovan vec,eto tako,sta ja znam, Bozija volja. Mozda bas gresim u radu u SAB-u,ali vi ste tu da pomognete,kao i uvek

Najveci neprijatelj svakog uzgajivaca gljiva je kontaminacija. Na printu, u spricu, u kolacu i tegli sa zitaricama ne zelimo apsolutno nista osim spora zeljene pecurke ili njenog micelijuma, no kako je sve oko nas kontaminirano raznoraznim sporama, svaki kontakt sprica,tegle itd sa ''prljavim'' vazduhom je rizik za neuspeh.
Izrada sprica sa sporama ili inokuliranje zitarica il agra je naravno najbolje ispred ''Laminar flow hood-a" (to je kutija u kojoj je ventilator iza hepa filtera koji kupi sav odpad iz vazduha tako da uvek radite u cistom zraku. Ali posto su ovi filteri dosta skupi, opredelio sam se za SAB

Sta je still air box?
'' kutija sa mirnim vazduhom '' je kutija od providne plastike koja sa jedne ili sa dve naspramne strane ima dva otvora za ruke.
Moja kutija ima 60 l (ne preporucujem manje od recimo 40l da bi stalo sve sta vam treba), a otvore za ruke sam napravio lemilicom- izcrtao krug flomasterom te ga pratio zagrejanim vrhom lemilice(najlaksa i najbolja metoda). kutija se okrene naopacke( dno je gore) i eto vam ga Still air box.
Naravno sab nema smisla ako nije cist od kontaminacija, stoga pre pocetka izrade sprica sa sporama ili inokuliranja cega god, kutiju moramo dobro ocistiti.
Za sterilisanje svega sto ima direktan dodir sa sporama koristim expres lonac. Skalpel,spric,casicu za vodu, vodu koja ce biti u spricu sterilisem na 11 psa 1 h, dok ruke, SAB, radnu povrsinu i ostalo sterilisem 70% izopripil alkoholom sa 30 % vode naravno ( bolje je sa vodom jer se alkohol duze zadrzava na povrsini koju cistimo)
Ja imam posebnu sobicu koja je nekad bila wc a sad sam je pretvorio u mali gljivarnik koji koristim i kod uzgoja marihuane.
Soba je komplet oblozena najlonom i trakom zalepljeni svi spojevi. celu sobu svemena na vreme prebrisem 5% asepsolom rastvorenog u vodi. Prozorcic uvek drzim zatvoren jer zelim sto manje vetra,promaje, svaki nagli pokret je rizik da nam usere stvar jer zapamrite-vazduh oko nas je kontaminiran svim i svacim.
''Ali odakle meni cela soba za te gluposti?" Netreba vam.
Still air box mozete postaviti bilo gde gde je cisto i gde nema promaje il bilo kakve kretnje vazduha npr radna ploca u kuhinji uz to da su svi prozori i vrata zatvoreni.
Samo pre pocetka rada trebali biste sve okolo SAB-a pospricati alkoholom da bi imali vece sanse za uspeh.
Dzabe vam naravno cist SAB ako su stvari koje ubacite u njega prljave ; zato je najbolje da expres lonac sa zitaricama i npr spricem i slakperom otvorite neposredno pre pocetka izrade sprica il inokulitanja i iz expres lonca pravo u SAB i bez pravljenja naglih pokreta jer je VAZDUH KONTAMINIRAN.

Dakle, kako ja to radim
sve sta mi je potrebno od alata i materijala stavim na stocic ispred ''ciste sobe'' i dobro prebrisem izopropilom. kako ga ocistim tako ga stavim na drugi stocic koji se nalazi u cistoj sobi. Sto na kome se nalazi SAB ima samo dve poprecne gaske( sredina je prazna), na te 2 daske je stavljena resetka iz zamrzivaca i onda preko ide still air box ( u fazonu sam da iako se nesto provuce od kontaminanata da padne dole, kroz resetke.


Expres lonac,koji je takodje prebrisan alkoholom otvaram tek u cistoj sobi,a alat i tegle pravo iz lonca ide pod SAB.
Zaboravih, pre svega navucem latex rukavice i masku za lice( ne zelimo da duvamo il se nakasljemo po printu sa sporicama).
Necu vam opisivati kako pravim spric i kako inokuliram zrnevlje i agar, samo cu reci da sta god da vam je potrebno da bude skroz cisto, odmah posle inokulacije, teglicu za zitaricama il petrijevku sa agarom trebate odmah zatvoriti, bez obzira sto su u SAB-u.
Ovo sad je vazno: najvise od kontaminacije cuvajte print sa sporama, jer ako njega isprljate, svaki sledeci pokusaj ce se zavrsiti neuspehom iako ste sve dobro sterilisali i ocistili!!!

I to bi bilo odprilike to.
Posle zavrsetka rada teglice sa brf kolacima il zitaricama za monotub tek skladistiti u cistu plasticnu kutiju namenjenu samo za to pa nju u ormar il gde vec hocete
Zakljucujemo da okolina, alat i materijali koje koristite nikada nisu previse sterilni,uvek moze cistije,nece da smeta; sto manje naglih pokreta okolo i u SAB-u; uopetreba maske i rukavica i uz naravno malo srece i sve ce ici kako treba
Ako jednoj dusi ova tema bar malo pomogne i da koju korisnu informaciju, moja misija je uspesno obavljena, a sta smatrate pogresnim,ispravite me i dodajte ako sam nesto zaboravio.
Zivi bili!

[faceOff]

Ne znam zašto misliš da dje bolje da dolje bude otvoren. Svojim kretnjama radiš strujanja koja ulaze
SAB mi je zatvoren. Operem ga, prebrišem alkoholnim octom, ostavim malo octa u SABu na dnu. Prebrišem sve alkoholom(tegle, skalpeli, šprice...) i stavim unutra. I dva tanjurića na kojima držim špricu, ubrus... I jedan mali raspršivač sa alkoholom.
I ostavim pola sata da eventualne spore padnu ili se zaljepe za zidove.
Nakon pola sata dezinficiram ruke sa rukavicama i sve iznutra pobrišem alkoholom. Kroz rupe. Osim dna. Malo pričekam i krećem s radom
Nego, jel ti taj položaj rupa ok tako na suprotnim stranama. Meni su obje na istoj strani, ali čini mi se da bi bilo lakše da su na susjednim

[kale.kikor]

Ja sam lud pa pre nego sto udjem u cistu sobu ostruzem se u tus kabini ko kreten i samo u gacama pravo na posao u cistu sobu, a kada sednem za sto ne mrdam se previse bas zbog strujanja vazduha.
Zavisi od dimenzija kutije gde busiti otvore. moja je pri vrhu 60 cm i bilo bi mnogo lakse da su rupe jedna pored druge na duzoj stranici kutije, ali ako je kraca, moze i sa strane.

[harp]

sab ti mora biti zatvoren dolje. samo makni rešetke ili jos bolje dodaj poklopac.
soba u najlonu je overkill, dovoljno je samo paziti da nije na propuhu za sto manje strujanje zraka. to plus ne lamatanja unutar sab-a i drzanje ruku iznad otvorenih zdjelica.
praksa za otežati zrak je voda plus sapunica, al ja osobno samo zašpricam nečim za dezinfekciju i ostavim važno. jedino gornji dio prebrisem da ne bi koja kap pala na uzorak.
također 30 min ostavim da vlazni zrak slegne sve potencijalne kontaminacije.
manje više za sada sve ok osim otvorenog sab-a koji bi mogao biti tvoj glavni problem.

[harp]

vidio sam par sab designa sa rupama na suprotnim stranama. bitno je da ti je ugodno kretati se.

[storm.raver]

Imas rupe sa strane i nemaš dno, što znači ekstremno strujanje vazduha, što dalje znači da to nije sab.

Vidi kale da ti kažem, a vezano za ovu rečenicu:
Ovo sad je vazno: najvise od kontaminacije cuvajte print sa sporama, jer ako njega isprljate, svaki sledeci pokusaj ce se zavrsiti neuspehom iako ste sve dobro sterilisali i ocistili!!!

Ti automatski pretpostavljas da print nije kontaminiran, a šanse za to su relativno male, odnosno zavisi koliko je profesionalan onaj koji je print pravio. Možda se tu krije razlog tvog neuspeha.
Sve što radiš je džabe ako je print kontaminiran, a to nikad ne znaš. Džabe sab, džabe sterilne tehnike.

Ako nije, jedino za šta ti treba sab je izrada šprice, a tegle onda možeš inokulirati i u kontejneru, ako imas upaljač da oprzis iglu.

Dosta oko saba nije toliko utemeljeno u stvarnosti, kao npr činjenica da se strujanje vazduha može sprečiti. Može se minimizirati, ali uvek će ga biti. Takođe mnoge stvari se perpetuiraju na shroomeriju i drugim sajtovima kao božje slovo što se tiče uzgoja gljiva, a veze sa mozgom nemaju.
Treba da znas da većina onih što pljušte jake uzgoje prvenstveno svoj uspeh duguju čistim printovima i antibakterijskim agarima.

Tldr: daj sve od sebe da u sabu kvalitetno izradis špric sa sporama, posle ti treba samo upaljac za iglu, i ekspres lonac da sterilises žitarice. Čak i tad možeš imati kontaminacije u teglama ako ti je print stigao prljav.

[Firmus]

Uspjet ces sigurno kad se ovako trudis. Ja bi koristio zatvoren box. Samo bi ubacio kroz rupe zapakirane sprice, spore i skalper. Prije nego ubacis u SAB, mozes prebrisat sve sta ubacis unutra sa alkoholom. Mislim da ti ne treba otvoreno dno, samo stavi rukavice i obrisi alkoholom rukavice, radnu plohu i ostatak ruka tj kožu. Ako zelis potrosit manje alkohola, mozes otvorit box i pospricat alkoholnim octom, pa onda nakon toga mozes prebrisat alkoholom iznutra.
Koliko sam skuzio, najbolja je opcija da ne radis sprice nego da sastruzes spore na agar, dovoljno je "nekoliko" spora da se uvate na agaru, iako nisam jos radio agar. A mozes npr dio pokusati tako, da stavis direktno na agar, a sa ostatkom napravi sprice. Ako print nije kontaminiran, uspjet ce ti bar 2 šprice. Sa jednim prosjecnim printom ionako mozes napravit 10 sprica od 10 mL.

Ali dobro je da eksperimentiras i da pazis na sve. Stvarno jest najbitniji dio gdje radis sa printom. I ja bi se prije tusirao i stavio svjezu odjecu prije nego bi to radio, nije to lose, ali mislim da je skroz dovoljno da jednostavno uzmes tu kutiju zatvorenu, obrises je sa alkoholnim octom, ostavis da se malo osusi, pa je obrises sa alkoholom. Prije svega si obrisao stol alkoholom, zatvorio prozor. I onda stavis na stol print u pvc vrecici, skalper, sprice koje su zapakirane. Prebrises cijeli skalper alkohol, i pvc vrecicu sa sporama i ako bas oces sprice koje su zapakirane. Prije nego ides rukama unutra svakako prebrisi rukavice sa alkoholom i ruke isto povise rukavica tj dlake. Prije nego ubacis skalper koji si prebrisao alkoholom, ispred kutije zapali metalni dio upaljacem nekim dobro, i onda ga ubaci u kutiju. Bar si osigurao da je skalper sterilan, plamen sterlizira vise od alkohola.

Isto tako za vodu, ja koristim destiliranu, prvi put kad sam radio kuhao sam vodu, ali mislim da to i nije toliko bitno s obzirom da bi destilirana voda trebala bit bez kontaminacija.

Mozes slobodno ubacit u SAB tu litru destilirane vode, prije toga je obrisi alkohol i ubaci kroz rupe, onda prije ubacivanje posudice u koju ces staviti vodu obrisi čašu i ubaci je, pa je opet obrisi alkoholom unutra, prije nego ulijes destiliranu vodu u čašu, pazi da alkohol ispari jer alkohol ubija spore, za to je dovoljno 1 min ili tako.

Ne trebas to mjerit koliko ti vode treba, dosta je otprilike. Ako ces radit 8 sprica od 10 mL, pokusaj da ima 80 mL vode u čaši tj ulij pri dnu čaše i eto. Ako bude vise ili manje sprica nema veze, sve izmedju 5 i 10 šprica po printu je ok. I onda spremi te šprice kad napraviš u pvc vrecu koju si prethodno prebrisao alkoholom, iako i one bi trebale bit sterilne. Najbolje nabavi one sa zip zatvarcem.

A ovo da drzis sobu stalno zatvorenu, ja sam procitao da to nije potrebno nego da je bolje da je inace soba prozracena jer ne mozes izbjec kontaminacije one su svugdje oko nas. Ako drzis sobu stalno zatvorenu mislim da se i povecava razina kontaminacija, a i svakako je dobro za zdravlje da je soba prozracena. Bitno je samo da zatvoris 5 min prije nego pocmes raditi da se smiri strujanje zraka.

Ovako je nekako moja intuicija, pokusaj sta mislis da je najbolje pa eksperimentiraj. Samo sve steriliziraj i uspjet ces. I ja radim ovih dana sprice opet, pa mozda snimim video gdje opisujem sta radim, pa moze neko pogledati je li se moze unaprijediti postupak.

I jos jedna napomena, pocmi pisati dnevnik i sve oznacavaj. Kad napravis neku spricu oznaci je markerom nekom sifrorom i zapisi datum i strain koji si stavio. Pa kad budes sve tocno oznacivao s vremenom ces znati sta funkcionira za tebe tj koja ti najvise metoda pase i sta si radio.

Ja sam samo napisao kako ja radim, ako tvoja metoda jos vise minimizira zracne struje, jos bolje

Najbolje pogledaj videa nekog tko je iskusan, zaboravio sma nazive kanala. Znam samo za ovaj kanal, koji je odlican
https://www.youtube.com/channel/UCjeI_v ... 46Nn9NiSCQ ( PhillyGoldenTeacher )

[storm.raver]

Koliko sam skuzio, najbolja je opcija da ne radis sprice nego da sastruzes spore na agar, dovoljno je "nekoliko" spora da se uvate na agaru, iako nisam jos radio agar. A mozes npr dio pokusati tako, da stavis direktno na agar, a sa ostatkom napravi sprice. Ako print nije kontaminiran, uspjet ce ti bar 2 šprice. Sa jednim prosjecnim printom ionako mozes napravit 10 sprica od 10 mL.
.
.
.
Isto tako za vodu, ja koristim destiliranu, prvi put kad sam radio kuhao sam vodu, ali mislim da to i nije toliko bitno s obzirom da bi destilirana voda trebala bit bez kontaminacija.

Da, dovoljno je par spora proklijace i uhvatice se na agaru. Prednost je što odmah vidiš na čemu si i ne gubiš masu vremena i gomilu žita. Spore brže proklijaju na agaru i micelijum se brže širi. Ali i ako dobijes čist micelijum na agaru svakako trebaš uraditi najmanje dva tri transfera, jer to je i poenta agara u kucnoj upotrebi, da izolujes najbolju genetiku. Sektor koji ti se najbrže širi na agaru i izgleda najrazgranatije, sa dugim belim rizomorfima, njega presađujes dalje na novu petrijevku.
.
.
.
Destilovana voda je demineralizovana, znaci u njoj nema minerala, nije sinonim za sterilnu vodu. U proizvodnji u destilovanu vodu iz vazduha dospe bezbroj milijardi spora budji i trista hiljada bilijardi endospora bakterija, mozda koji milion manje ako je higijena u proizvodnji visoka. Ali to je tehnička voda, znaci higijena je osrednja. Vodu za šprice treba kupovati u apoteci, tražiš ampule sa sterilinom vodom za injekcije. Ili sterilizujes vodu, nema treće. Kuvanje samo ubija vegetativne organizme, ne i spore.

[Firmus]

Destilovana voda je demineralizovana, znaci u njoj nema minerala, nije sinonim za sterilnu vodu. U proizvodnji u destilovanu vodu iz vazduha dospe bezbroj milijardi spora budji i trista hiljada bilijardi endospora bakterija, mozda koji milion manje ako je higijena u proizvodnji visoka. Ali to je tehnička voda, znaci higijena je osrednja. Vodu za šprice treba kupovati u apoteci, tražiš ampule sa sterilinom vodom za injekcije. Ili sterilizujes vodu, nema treće. Kuvanje samo ubija vegetativne organizme, ne i spore.

Vjerojatno sam tu zajebo, iako sam prvi put koristio vodu koju sam kuhao 15 min i bilo je sve ok. Kako predlazes onda da steriliziram vodu, ako ne nadjem u apoteci?

edit: bio do prve apoteke, nisu imali, pogledat cu sutra. Ako ne, namjeravam kuhati u loncu sat vremena vodu, valjda ce to bit ok.

[storm.raver]

Vjerojatno sam tu zajebo, iako sam prvi put koristio vodu koju sam kuhao 15 min i bilo je sve ok. Kako predlazes onda da steriliziram vodu, ako ne nadjem u apoteci?

edit: bio do prve apoteke, nisu imali, pogledat cu sutra. Ako ne, namjeravam kuhati u loncu sat vremena vodu, valjda ce to bit ok.

Čudno, obično imaju te ampule u svakoj apoteci jer primaju mnogi ljudi intravenozne inekcije sa lekom koji se rastvara u vodi (koja naravno mora biti sterilna); možda se to kod vas zove nekako drugačije, nisam siguran, prilično je obična stvar da ima sto imena.

Ako ne nadjes, najbolje da prokuvas vodu 10 min na 100°, pustis samo malo da se ohladi, zatim sipas tu vodu u teglu i sterilizujes je kao žitarice (i zajedno sa njima da se ne pali ekspres sto puta i troši struja )Taj proces kad obavis, voda u tegli je sterilna i neće ti grow pasti zbog nje. Ako voda bude samo prokuvana, ti ubijes sve zive organizme i spore budji, ali vecina spora bakterija lagano preživi 100°, zato je potrebno koristiti ekspres lonac, jer u njemu temperature idu preko 115° i spore bakterija počinju da umiru.