The Majka

Jos jedan jako dobar tip za agar je dodavanje hidrogen peroksida u mjesavinu. Nakon sto se pripremi mjesavina agara, potrebno je pricekati da se agar ohladi do nekih 50 st.C.(peroksid se razgraduje na 60 st.C.) i onda se moze dodati izmedu 6 i 10ml 3% Hidrogen peroksida na 1l agara. To se sve moze promjesati sa nekon zlicom ili stapicem i sve je spremno za petrijevke. Hidrogen peroksid bi trebao ubiti sve zrakom nosene spore i bakterije. To isto tako znaci da ce ubiti i ove nase zeljene spore pa ga nije moguce koristiti kada se agar koristi direktno sa sporama. Prvi put je spore potrebno staviti na cisti agar a tek prilikom sljedeceg prijenosa je moguce koristiti peroksid. Buduci da micelj kada je vec razvijen sadrzi enzime koji razgraduju Hidrogen peroksid, nakon dan do dva koliko je micelju potrebno da se privikne na peroksid, nastavit ce rasti kao i u peroksid free agaru, najnormalnije. To je izrazito korisno jer ce sve ostale bakterije i spore koje eventualno nadu put do agara, biti ubijene pri knotaktu sa povrsinom dok ce micelj najnormalnije rasti. Koliko sam citao na ovaj nacin je cak moguce raditi sa agarom na otvorenom, bez glove boxa. Prilikom sljedeceg transfera na novi agar, planiram koristiti peroksid jer mi se stalno desava pojava neke bakterijske kontaminacije makat sve radim pazljivo, u glove boxu, koristim para film itd. Sve je ok i vec sam skoro gotov sa izoliranim strainom ali nikako da dobijem 100% cisti agar, uvijek je negdje na rubu ili sitno na par mjesta nekakva cudna nezeljena kolonija koja mi zadaje glavobolje ahhh....

E nisam znao za ovo da treba bit 50 stupnjeva temperatura.Neki kažu da peroxid isto oštećuje micelij, ali za ovakvu primjenu kad znaš da je kontaminirano, vjerovatno može bit dobar. Ja ću definitivno ovo probat, jer je meni na agaru već sad šuma plijesni.
Evo još jedan odličan tip koji sam čuo pred par dana. Kad znaš da imaš posla s kontaminiranim micelijem ili printom, onda umjesto u petrijevim radiš u normalnim teglicama. Nakon par dana kad se počnu razvijat plijesni i micelij, preko toga preliješ sloj toplog agara. Navodno će micelij preživjeti i doći do površine prije kontaminacije, pa ga se onda može izrezat.
Pokušat ću kombinaciju ove dvije metode, djeluje vrlo obećavajuće.

Ja cu napraviti test, probat cu ostaviti normalni iagar i ovaj s peroksidom nezasticen pa me zanima da li ce ovaj drugi ostati cist nakon par dana. Inace peroksid ne steti micelju, samo sporama. Naravno pod uvjetom da nije pre velika koncentracija. Jedino kada se radi transfer, micelju ce trebati dan, dva, tri da se privikne odnosno da pocne stvarati te enzime za razgradnju peroksida. Nakon toga kako raste, tako razgraduje peroksid na vodu i kisik, dakle nista stetno. Mene je ovo ful razeveselilo jer nikako da zavrsim tu fazu sa agarom, stalno neka tockica tu i tamo, nikad 100%.
...javi rezultate, ja cu postat sliku ovog testa: agar vs peroxide agar

P.S.
Ovaj tip drugi koji si spomenuo, to sam isto cuo da je dobra metoda kad se kloniraju divblje gljive iz prirode. Najbolje je isto tako dio strucka(micelj) zaliti vrucim agarom. Na taj nacin se ubiju kontaminacije a micelj s unutarnje strane ostane zasticen i izbije na povrsinu..heh..cool

Evo jucer sam prebacio u novi peroksidirani agar...za sad nema ni traga nekom rastu...sto je i normalno ali svejedno sam na iglama

Ej kako ti ide to s peroxidom? Meni ništa, opet šuma black pin plijesni, neznam više šta da radim, morat ću prije stavljanja na agar oprat micelij u peroxidu, valjda će to funkcionirat, lud sam više...

Meni prva tura sa peroxidom ostala skoro 2 tjedna kompletno cista bez ikakvih kontaminacija ali nazalost ni micelj nije poceo rasti pa sam sve bacio. Koristio sam peroksid 6% onaj uljni ali ocito nije dobar pa sam sad nabavio cisti 3% u tekucem obliku(iz laba) i probao ponovo. Sva sreca pa imam jedan agar cisti pez pedoksida za presadivanje jer da ga nisam imao sad bih opet morao opet sa sporama pocet. Javim kako ide, 15. u subotu sam ovo presadio pa ocekujem da bi vec sutra trebalo se pocet sirit. Btw. cudi me da si imao kontaminaciju. Ja sam do sada svaki put imao agar po rubovimakontaminiran sa nekom bajterijom ali sa peroxidom mi je svih 6 komaada potpuno cisto ostalao i nakon skoro 2 tjedna. Moguce da nije peroksid dobar ili da si ga stavio u pre vruci agar? Samo nagadam jer mi je cudno...Inace peroxid moze provjerit tako da bacis neko povrce npr. mrkva, krumpir u njega i ako se stvaraju mjehurici i sisti onda znas da je ok.

Evo napokon vidim znakove rasta. Dakle sa 3% peroxidom(6ml na 1l agara) trebalo je nesto vise od 4 dana da se pocnu vidjeti znakovi rasta. Sada se samo nadam da ce nastaviti i onda cu probati jos jedan transfer, i to bi onda trebalo biti to. Stvarno sto se tice kontaminacija peroxid vidljivo pomaze...agar's a bitch...Hypno, kak tebi ide?

Ma ja totalno nemam sreće s tim agarom... Stavio sam peroxid kad je tegla s agarom već bila dovoljno hladna za držat u ruci, nisam mjerio temperaturu, ali mislim da nije bila pre topla. U svim teglama cijela šuma kontaminacija, čak i onih kojih nije bilo prije stavljanja. Ove dane ću probat sljedeću turu, običan agar al prvo oprat micelij u peroxidu. I ovo s teglicama je totalna zajebancija, morat ću jedan dan do Zagreba samo po petrijevke i parafilm, očito neide bez toga...

ja sam nabavio petrijevku,pire za minut imam,med imam ali agar u nemogu da nadjem,jel moze i bez njega?
mislim glupo mi agar bez agara ali pitam samo?

Nemože. Ni ja dugo nisam mogao do agara pa sam istraživao alternative, al ništa nema ista svojstva. Želatina se pretvori u tekućinu nakon nekoliko dana.