Ecuador y Brasil, prueba I.

[luther7hrol]

Pozdrav!

Imam dva printa, jedan velicine 5x4 i drugi 4x4. Pošto mi je ovo nulti pokušaj ikada, zanima me bi li bilo pametno printove izrezati i podijeliti, u slučaju da nešto zeznem u pripremi spora? I, koliko mogu napraviti 10 mililitarskih šprica od takvog jednog printa? Je li dovoljno vodu samo malo prokuhati, da se sterilizira, u koju stavljam spore, ili ona treba biti skroz destilirana? Hvala svima.

[Homunculus]

Za prvi put je najbolje da slediš gajd do detalja, ako ti uspe već ćeš sam videti gde možeš da improvizuješ. Kupi destilovanu vodu za spore nije ona skupa, sterilizuj je u ekspres loncu pola sata, tako ćeš biti siguran da si u tom delu sve uradio kako treba. Ako tu na početku zezneš džaba ti je sve posle što radiš kako treba. Ja ne bih sekao print pa makar te makaze bile i sterilne skroz...ja sam koristio jedan print više puta, istružem koliko mi treba spora, zatvorim i ostavim za sledeći put, mada sam sve to radio u GloveBoxu a ne na otvorenom vazduhu. Od dela printa koji je 1cmx1cm ja sam opušteno pravio 5 špriceva od 10ml. Od ovolikog printa voda mi nije ljubičasta od spora ali se spore mogu videti golim okom u vodi...Aj srećno!

[luther7hrol]

Puno hvala, drug

Koliko je ustvari bitno da si napravim glovebox za prvi put? Kolika je šansa da se spore unište radeći izvan gloveboxa, iako je prostorija zatvorena, sve sterilizirano itd? U guideu se ne spominje box, pa sam se zato zapitao moze li i bez, barem za prvi pokušaj, dok, opet, s druge strane, ne želim uništiti toliko vrijedne spore.

[Homunculus]

Da, naravno da može bez GloveBoxa, ja sam ga koristio pošto sam želeo dodatno da se osiguram. Mnogi sa foruma su sasvim uspešno uzgajili šrumse i bez toga, samo se potrudi da ispoštuješ sterilnu proceduru - rukavice, maska, površine prebrisane alkoholom, poprskaj prostoriju sa Oustom, gledaj da ne bude promaje itd. Samo napred

[luther7hrol]

Eh, sjetio sam se da sam negdje vidio guide za glove box ovo ljeto, e sada sam ga opet pročitao i ubrao da je stvar prilično jednostavna, i riješio da ga napravim. Sad vidim, to je tvoj guide, svaka čast, care! Nadam se da ću uspjeti napraviti nešto slično, koristeći konzerve umjesto hilzni (stvarno ne znam gdje da ih nađem, a ni PVC cijevi mi nisu pri ruci). Omekšao bih oštri rub konzervi korištenjem izolir-trake. Samo mi jedna stvar nije jasna, treba li vršiti vakuumiranje boxa? Negdje sam vidio da se često dodavaju ventilatori sa strane, zbog svježe arije.

[luther7hrol]

Eh, sjetio sam se da sam negdje vidio guide za glove box ovo ljeto, e sada sam ga opet pročitao i ubrao da je stvar prilično jednostavna, i riješio da ga napravim. Sad vidim, to je tvoj guide, svaka čast, care! Nadam se da ću uspjeti napraviti nešto slično, koristeći konzerve umjesto hilzni (stvarno ne znam gdje da ih nađem, a ni PVC cijevi mi nisu pri ruci). Omekšao bih oštri rub konzervi korištenjem izolir-trake. Samo mi jedna stvar nije jasna, treba li vršiti vakuumiranje boxa? Negdje sam vidio da se često dodavaju ventilatori sa strane, zbog svježe arije.

Imam još jedno pitanje: vidio sam da Roadkill radi rupice s bušilicom preko čitavog poklopca inkubatora. Trebam li koracima iz guidea dodati i ovaj: bušenje rupica u poklopcu gornjeg kontejnera, budući da ne znam koliko bi to utjecalo na temperaturu i vlažnost zraka?

[shroomko]

Glovebox je neophodan, makar bio prozirna plastična vrećica i pošpricaj unutrašnjost izbljeljivačem. Izbjeljivač ostavlja fleke pa ispod stola na kojem radiš stavi neki veliki komad najlona (vreća za kiseljenje zelja npr - 5 kn). Obavezno nosi rukavice koje si prebrisao alkoholom. Kirurška maska nije neophodna ali košta samo 2 kn u hospitaliji i spriječit će da bakterije iz tvojih usta dođu u zrak.

U ekspres lonac staviš:
- deci destilirane vode u staklenki (čep neka bude probušen i prekriven mikropore trakom ili onom sintetičkom vatom)
- skalpel ili nešto s oblim vrhom čim ćeš spore prenijeti iz printa u čašu
- 2 čašice za rakiju

Sve to zamotaš posebno u alu-foliju. Pola sata nakon što lonac počne pištiti to je sterilno. Pričekaš da se ohladi i onda radiš.

Imaš dosta videa na internetu i pogledaj bar 3-4. Možeš čak i probati sve to napraviti bez spora i van gloveboxa nekoliko puta za vježbu da ne bi bilo neugodnih iznenađenja. Nešto sastruži skalpelom ili nečim sa alufolije u čašu i napuni u špricu da vidiš kako to ide.

Ako sjebeš sad i uneseš kontaminaciju u print zajebao si. Ovo je najbitniji korak.

[luther7hrol]

Glovebox je neophodan, makar bio prozirna plastična vrećica i pošpricaj unutrašnjost izbljeljivačem. Izbjeljivač ostavlja fleke pa ispod stola na kojem radiš stavi neki veliki komad najlona (vreća za kiseljenje zelja npr - 5 kn). Obavezno nosi rukavice koje si prebrisao alkoholom. Kirurška maska nije neophodna ali košta samo 2 kn u hospitaliji i spriječit će da bakterije iz tvojih usta dođu u zrak.

Hvala, lave!

Znaci, zamotam svaki od tih predmeta u foliju i kuham u ekspres loncu sve skupa, onda je sterilno, ubacim u sterilizirani GloveBox i uvijek radim unutar njega?

A zrak u GloveBoxu, treba li se odstraniti vakuumiranjem ili napraviti malu ventilaciju prema van?

[shroomko]

Znaci, zamotam svaki od tih predmeta u foliju i kuham u ekspres loncu sve skupa, onda je sterilno, ubacim u sterilizirani GloveBox i uvijek radim unutar njega?

Da. Pogledaj video "let's grow mushrooms" odlično je sve objašnjeno za početnike.

A zrak u GloveBoxu, treba li se odstraniti vakuumiranjem ili napraviti malu ventilaciju prema van?

Ne. Što manje kretanja zraka to bolje. Pošpricaš sve izbljeljivačem i to će ubiti sve živo.

[oseloth]

Od četvrtine printa možeš napraviti 10ml špricu a sa njom napikat deset tegli.

Glowbox nikad isam koristio. Kuoi isosan u ljekarni. Rastopi propisano na nešta vode i to stavi u špricaljku. Sve lijepo sa time pošpricaj i steriliziraj. Doslovno i zrak oko sebe. Rukavice na ruke i nećeš imati problema. Najbitnije od svega je kvalitetna sterilizacija medija.